(۳,۳’-(p-Tolylmethylene)bis(4-hydroxy-2H-chromen-2-one)) (8a) White solid;Yield: 95%; m.p. 265-267 ^oC; IR (KBr,cm^-1) page 77: 3430 (OH), 1666 (-C=O stretching of –COOR group), 1612 (C=C- stretching of olefin), 1441, 1499, 1563 (C=C- stretchind of aromatic ring), 1349 (C-O-C lacton), 765 (C-H out of plane bending); ^۱H-NMR (500 MHz, DMSO, δ / ppm ) page 75: 7.94 (1H, s, g), 7.92 (1H, s, h), 7.62 (2H, t, ej, J = 7.5 Hz), 7.39 (2H, d, dk, J = 8 Hz), 7.35 (2H, t, if, J = 7.6 Hz), 7.05 (4H, s, bc) , 2.26 (3H, s, a) .
۳-۳-۹) تهیه ترکیب تتراکیس (۱b)
۳,۳’,۳'’,۳”’-(۱,۴-Phenylenebis(methanetriyl))tetrakis(4-hydroxy-2H-chromen-2-one) :
ابتدا ۴-هیدروکسی کومارین( ۲mmol) و ترفتالدهید ( ۱mmol)داخل یک بالن ریخته شد سپس ۸-۱۰ ml اتانول به عنوان حلال به ظرف واکنش اضافه شد ( ۱۳×۱۰^-۶ mol%تیوره نیز به عنوان کاتالیست استفاده شد). یک همزن مغناطیسی نیز درون ظرف قرار داده شد به منظور حرارت دهی یکنواخت (نه فقط انتهای بالون) از حمام آب یاشن که قبلا حرارتدیده و به دمای یکنواخت ۸۰درجه سلسیوس رسیده است، استفاده شد و واکنش به مدت ۶ ساعت رفلاکس شد. محصول به صورت پودر سفید رنگ با بهره ۴۰ % و mp = 306-308 ^oCبه دست آمد.

شکل(۳-۹) : سنتز ترکیب (۱b)
(۳,۳’,۳'’,۳”’-(۱,۴-phenylenebis(methanetriyl))tetrakis(4-hydroxy-2H-chromen-2-one)) (1b) White solid; yield: 40%; m.p. 306-308 ^oC; IR (KBr,cm^-1) page 82: 3435 (OH), 1661 (-C=O stretching of –COOR group), 1614(C=C- stretching of olefin), 1501, 1564 (C=C- stretching aromatic ring), 1345 (C-O-C lacton), 1097 (C-O ether) , 764 (C-H out of plane bending); ^۱H-NMR (400 MHz, CDCl₃,δ / ppm) page 80: 11.53, 11.32(2H, s, k), 8.08, 7.6((2H, d, e)(2H, d, f)) , 7.62 (4H, t, hc, J =7.8 Hz), 7.36- 7.42 (8H, m, bigd), 7.22 (4H, s, a), 6.11(2H, s, j); ^۱۳C-NMR(100 MHz, CDCl₃, δ / ppm) page 80:168 (C-OH), 165 (C=O), 152, 138, 133.9, 132.8, 126.8, 124.9, 124.3, 116.6, 104 (aromatic), 35.9 (aliphatic).
۳-۴) باکتری ها و روش آزمون حساسیت باکتریایی :
۳-۴-۱) باکتری هایمورداستفاده: باکتری های مورد استفاده برای انجام تست حساسیت آنتی بیوتیکی از سویه های ( انواع خاص باکتری ) استاندارد ATCC ویا PTCCانتخاب شد.

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

باکتری های مورد استفاده عبارت بودند از :
Staphylococcus aureus ATCC 29213
Escherichia coli ATCC 25922
Bacillus subtilis ATCC 6633
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Enterococcus faecalis ATCC 29212
۳-۴-۲) آزمون تعیین حساسیت باکتریایی :
محیط نیم مک فارلند محیطی در تست آنتی بیوگرام است که میزان کدر بودن نمونه حاوی باکتری خود را با آن مقایسه می کنیم . این محیط حاوی ۱.۵×۱۰^۸ عدد باکتری است . نحوه تهیه این محیط در آزمایشگاه به شرح زیر است :
مواد لازم برای تهیه محیط نیم مک فارلند :
کلرور باریم دهیدراته، اسیدسولفوریک، مزور، بالن ژوژه، لوله آزمایش در پیچ دار استریل
روش انجام کار:
استاندارد نیم مک فارلند سولفات باریم به روش زیر تهیه شد :
a)ml 5/0 از کلرور باریم (BaCl₂) mol/l 048/0 (2H₂O .W/VBaCl₂ ۱۷۵/۱%) را به ml5/ 99اسید سولفوریکmol/l 18/0 (V/V 1%) اضافه نموده و با هم زدن مداوم سوسپانسیون بدست آوردیم.
b) چگالی صحیح کدورت استاندارد با بهره گرفتن از اندازه گیری جذب در اسپکترو فتومتر با طول مسیر نوری cm1، مشخص شد. جذب نوری کدورت استاندارد نیم مک فارلند طبق دستورالعملدر طول موج nm625، بین ۰۸/۰ تا ۱۳/۰ بود.
c) سوسپانسیون سولفات باریم باید به مقدار۴-۶ میلی لیتر در لوله های در پیچ دار هم اندازه با لوله های سوسپانسیون باکتریایی ریخته شد.
d) درب این لوله ها محکم بسته شده و در دمای اتاق و در تاریکی نگهداری گردید.
e) استاندارد سولفات باریم قبل ازهر باراستفاده به شدت (ترجیحا با ورتکس مکانیکی)
همزده شد، تا کدورت یکنواختی ایجادگردد.
انجام روش آگار دیفیوژن (Agar diffusion )
محیط مورد استفاده در روش آگار دیفیوژن (Agar diffusion ) مولرهینتون بود و pH آن بین ۴/۷-۲/۷ تنظیم شد. بعد از آماده سازی محیط مولر هینتون ، حدود ۳۰-۲۵ میلی لیتر از آن را در یک پلیت ریخته بدین وسیله قطر ۱۰۰ میلی متر از محیط کشت مورد نظر حاصل گردید. جهت اجتناب از خشک شدن سطح محیط باید پلیتها را درکیسه‌های پلاستیکی نگهداری شد.
بعد از جدا کردن( ایزوله کردن) باکتری های استاندارد در محیط کشت، مقداری از کلونی باکتری را به وسیله انس (نه لوپ) برداشته ودر سرم فیزیولوژی استریل حل نمودیم . از آنجا که در تست آنتی بیوگرام میزان کدر بودن خیلی مهم است ، بنابراین در انتخاب مقدار نمونه دقت لازم به عمل آمد و نمونه با کدورتی برابر نیم مک فارلند تهیه شد. بعد از تهیه محلول هموژن، آن را به محیط کشت مولر هینتون انتقال داده و به طور کامل به وسیله سواب استریل، محیط کشت را به صورت چمنی کشت دادیم به طوری که هیچ محلی در محیط خالی نماند. بعدازکشت،در محیط مولر هینتون با انتهای یک پیپت پاستور استریل، چاهک هایی را ایجاد شد. نحوه ایجاد کردن چاهک ها در محیط کشت مولر هینتون ، به صورت دایره ای  بوده و فاصله این چاهک ها از یکدیگر حدود ۱۲ تنظیم شد. این چاهک ها از دیواره پلیت هم فاصله داشتند . بعد از ایجاد چاهک ها ، رقت ۱۲۸۰ میلی گرم بر لیتر را از مواد سنتز شده تهیه کرده بعد از فیلتر کردن به هر چاهک اضافه شد. در پلیت را بسته و به مدت ۲۴ ساعت آنها را در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد ، انکوبه شد.بعد از ۲۴ ساعت پلیت را زیر چراغ بررسی و آنگاه قطر هاله عدم رشد را با خط‌کش اندازه گیری شد و درجدول (۳-۱) گزارش شد.در اطراف برخی از دیسک ها هاله عدم رشد وجود داشت که این نشان دهنده حساس بودن آن باکتری به آن ماده سنتزی بود. همچنین در اطراف بعضی از چاهک ها هیچ گونه هاله ای مشاهده نشد که در این حالت باکتری مربوطه نسبت به آن ماده مقاوم گزارش شد .
فصل چهارم:
نتایج
۴-۱) تفسیر طیف هایترکیب (۱a)
(phenylmethylene)bis(4-hydroxy-2H-chromen-2-one)- :3,3′

طیف ^۱H NMR ترکیب (۱a)

شکل(۴-۱) :طیف ۱H NMRترکیب (۱a)
۴-۱-۱) تفسیر طیف ^۱H NMR تر کیب (۱a) :

شکل (۴-۲) طیف ^۱H NMR گسترده ناحیه آروماتیک ترکیب (۱a)
طیف۳,۳’ - (Phenylmethylene)bis (4-hydroxy-2H-chromen-2-one) (1a) (400 MHz)¹H NMR
در حلال ( استون ) جابجایی شیمیایی (ppm,δ) پروتون های m را در δ = ۱۱.۵۳ به شکل پهن نشان داد . پروتون های h و g در δ = ۸.۰۳ با J = 8 و J = 1.6با سطح زیر پیک معادل دو پروتون به شکل dd ظاهر شدند . پروتون های e و j در δ = ۷.۷۶ و با J = 7.8 وJ = 1.6 و با سطح زیر پیک معادل دو پروتون به شکل td ظاهر شدند . پروتون های d،f،k،i در δ = ۷.۴۷-۷.۵۱ با سطح زیر پیک معادل چهار پروتون به صورت m ظاهر شدند و پروتون های a،b و c در δ=۷.۳۱-۷.۳۶ با سطح زیر پیک معادل پنج پروتون به صورت m ظاهر شدند . در نهایت پروتون l در δ=۶.۱۶ با سطح زیر پیک معادل یک پروتون به صورت s ظاهر شد.
۴-۱-۲) تفسیر طیف ^۱۳C NMR تر کیب (۱a) :

شکل( ۴-۳)طیف ^۱۳C NMR ترکیب (۱a)
طیف ^۱۳C NMR(100 MHz) (1a) چهارده پیک نمایش داد.
این ترکیب در حلال (استون)، جابجایی شیمیایی کربن آلیفاتیک را در ۳۷.۰ ، کربن های حلقه آروماتیک را در ۱۵۳.۳، ۱۳۶.۸، ۱۳۳.۸، ۱۲۹.۳، ۱۲۷.۶، ۱۲۷.۴، ۱۲۵.۷، ۱۲۴.۸، ۱۱۷.۶، ۱۱۷.۴، ۱۰۵.۸ و کربن کربونیل و کربن حاویOH را به ترتیب در۱۶۵.۴ و ۱۶۸ نشان داد.
۴-۱-۳) تفسیر طیف IR ترکیب (۱a) :

شکل (۴-۴) طیف مادون قرمز ترکیب (۱a)
پیک های شاخص گروه های عاملی در طیف IR ترکیب (۱a) :
در طیف IR ثبت شده در KBr این ترکیب پیک مربوط به ارتعاش کششی O-H در ۳۴۳۸ ، ارتعاشات کششی C=O کربونیل در ۱۶۶۶ ، ارتعاشات کششی C=C- اولفینی در ۱۶۱۲ ، ارتعاش کششی C=C آروماتیک در ۱۴۴۶ و ۱۴۹۵ ارتعاش کششی C-O-C لاکتونی در ۱۳۴۸ ، C-O اتری در ۱۱۰۰ و ارتعاش خمشی C-H در(cm^-1) 761 مشاهده شد .